FISH在淋巴瘤诊断中的应用

年9月11日淋巴造血系统疾病学组年会以线上形式呈现。卫星会环节，安必平邀请了医院的王哲教授带来专题讲座《FISH在淋巴瘤诊断中的应用》。王哲教授从淋巴瘤分类、病理诊断以及相应的分子异常介绍了FISH在淋巴瘤中的应用，最后结合病例对淋巴瘤整体诊断思路进行梳理，为大家带来了一场生动的学术分享。

淋巴瘤是中国常见的恶性肿瘤之一。年中国新发霍奇金淋巴瘤例，死亡例；新发非霍奇金淋巴瘤例，死亡例。淋巴瘤病理类型复杂，异质性强，治疗原则各有不同。近年来，随着人们对淋巴瘤本质认识的不断深入，淋巴瘤在诊断和治疗方面出现了很多新的研究结果，患者生存得到了改善。淋巴瘤中经常发生一些染色体的畸变，如断裂、融合，导致基因表达异常；而这些异常可以使用荧光原位杂交技术（FISH）进行检测。淋巴瘤中重现性的细胞遗传学异常很多，其中大部分可以用来辅助淋巴瘤诊断（表1）。如MYC-IGH融合基因常发生在伯基特淋巴瘤，BCL2-IGH融合常发生在滤泡性淋巴瘤。慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤中常出现13q缺失（约55%）、11q缺失（12%-18%）、17p缺失（5%-10%）；其中11q和17p缺失与ATM、TP53基因缺失和功能失去有关。还会出现获得性的异常，如12号染色体三体（约15%）；这些变异与临床的特征非常密切，可使用FISH方法来判断预后。预后差的比较为del（17p）＞del（11q）＞trisomy12＞正常FISH结果＞isolateddel（13q）。MAF-IGH、FGFR3-IGH融合探针应用在多发性骨髓瘤中较多。

表1淋巴瘤常见的细胞遗传学异常

讲座中还从探针类型进行了介绍，并进行案例分享。

01

基因分离探针（染色体易位）

分离探针的设计将异常基因断裂位点两端分别标记为红色和绿色，若基因未发生断裂重排，则表现为两个融合信号（阴性）；若基因发生断裂重排，则表现为一红一绿一融合（典型阳性信号）。王哲教授介绍可以使用三通滤镜观察细胞核内出现的单色信号（红色/绿色），判断是否产生信号分离。淋巴瘤中常用的分离探针包括MYC、BCL2、BCL6、CCND1断裂探针，主要用于诊断Burkitt淋巴瘤，双打击淋巴瘤和套细胞淋巴瘤；其中BCL2断裂探针可用于辅助诊断滤泡性淋巴瘤。

Burkitt淋巴瘤的病理诊断思路

病例1

男性，63岁右颈部淋巴结肿大，HE形态以一致的中等大小的细胞为主，并非典型的弥漫大B细胞淋巴瘤，核分裂多，有一定异形。初步判断为不典型Burkitt淋巴瘤以及不典型弥漫大B细胞淋巴瘤。免疫组化表现CD20（+）、CD10（+），判断为生发中心来源的，BCL6（-）、MUM1（-）、Ki67（+）、BCL2（强阳）、MYC阳性（＞70%）。

王哲教授提示，虽然以上指标也有一些在Burkitt淋巴瘤中表达，但是综合来看并不是Burkitt淋巴瘤，更像是双打击的弥漫大B细胞淋巴瘤。使用FISH探针检测后发现，MYC断裂探针为阳性，BCL2断裂探针为阳性；由此整体诊断为双打击淋巴瘤。诊断为高级别B细胞淋巴瘤，伴有MYC、BCL2基因重排。

双打击大B细胞淋巴瘤最初在Burkitt淋巴瘤中发现，常见MYC、BCL2、BCL6基因易位，其中MYC+BCL2DH常表现为GCB表型，MYC+BCL6DH常为ABC表型，若MYC+BCL2+BCL6则为三打击淋巴瘤，是预后差的表现。而该类淋巴瘤还可发生于TdT+B淋巴母细胞瘤（偶见）、浆母细胞淋巴瘤（罕见）、低级别滤泡性淋巴瘤（罕见），都与预后差相关。如果MYC的转位配对基因为免疫球蛋白(如IGH、IGK、IGL等),也是提示预后差的表现。

病例2

间变型弥漫大B细胞淋巴瘤

病例形态特征为弥漫出现间变细胞/在弥漫大B的背景下出现至少10%的间变细胞。免疫组化与FISH表现见图1。其中细胞遗传学表现除了经典的断裂以外，还会出现MYC/BCL2/BCL6的基因多拷贝。王哲教授提示大家注意，在分离探针的应用中，不仅要